Каннабиноидные противоречия
Активация одного из подтипов рецепторов, связывающих каннабиноиды (активные ингредиенты марихуаны), подавляет воспаление, что делает этот рецептор многообещающей мишенью для лечения аутоиммунных заболеваний, таких как рассеянный склероз и осложнения инсульта, развивающиеся при повреждении тканей иммунными клетками. Однако факт наличия этих рецепторов на нейронах вызвал горячие споры среди специалистов, что может значительно снизить потенциал новой терапевтической мишени.
Традиционно считается, что в основе вызываемых марихуаной ощущений лежит связывание каннабиноидов с одним из типов каннабиноидных рецепторов CB1, в больших количествах экспрессируемых нейронами головного мозга. Специалисты связывают особенности функционирования этих рецепторов с целым рядом проблем, начиная от депрессии и заканчивая ожирением и сердечно-сосудистыми заболеваниями, а также с такими терапевтическими эффектами как облегчение боли и подавление тошноты. (Препарат Маринол – синтетический аналог активного компонента марихуаны – в 1985 году одобрен для подавления тошноты и улучшения аппетита у больных злокачественными заболеваниями.) Несмотря на то, что ряд специалистов настаивает на целебных свойствах каннабиноидов, для Управления по контролю за продуктами и лекарствами США одобрение соединений, входящих в список №1 (запрещенных правительством на основании их опасности для здоровья и отсутствия оправданного медицинского применения), является рискованным шагом. (Хотя лет сто назад в аптеках свободно продавали в т.ч. и такие лекарства, как на этом снимке :)
Около 10 лет назад ученые идентифицировали второй вариант каннабиноидных рецепторов – CB2. Они обнаружены на иммунных клетках и, судя по всему, играют определенную роль в формировании иммунного ответа. До сих пор считалось, что CB2-рецепторы практически отсутствуют на клетках мозга. Это означает, что избирательное воздействие на эти рецепторы позволит избежать психотропных эффектов каннабиноидов и облегчит получение официального одобрения. Однако недавно одна из исследовательских групп продемонстрировала доказательства наличия большого количества CB2-рецепторов на поверхности нейронов. Подтверждение этого факта может сильно омрачить надежду на создание воздействующих на CB2-рецепторы противовоспалительных препаратов, не обладающих нежелательными побочными эффектами.
Группа Рона Тума (Ron Tuma), физиолога из Temple University (г. Филадельфия, штат Пенсильвания) занимается изучением роли CB2-рецепторов в развитии рассеянного склероза и инсульта. CB2-рецепторы в большом количестве экспрессируются иммунными клетками, и ученые хотели проверить, подавляет ли их активация воспаление. В июне этого года они опубликовали в журнале Microvascular Research статью, согласно которой избирательное воздействие на CB2-рецепторы значительно уменьшает зону повреждения и некроза ткани после инсульта у мышей.
Одновременно ученые из университета Окленда, Новая Зеландия, работающие под руководством фармаколога Мишель Глас (Michelle Glass), установили, что активация CB2-рецепторов способна защищать нейроны от повреждений, скорее всего, благодаря предотвращению активации воспалительных процессов иммунными клетками микроокружения нейронов головного мозга или микроглии.
Исследователи надеются, что, из-за почти полного отсутствия CB2-рецепторов на нейронах, избирательно связывающиеся с ними препараты не будут оказывать психотропных эффектов, присущих их аналогам из списка №1.
Однако в этот бочке меда есть и ложка дегтя. Микробиолог Эммануэль Онаиви (Emmanuel Onaivi) из университета Уильяма Патерсона (г. Уэйн, штат Нью-Джерси) и его коллеги в прошлом году продемонстрировали, что введение находящимся в состоянии стресса мышам агонистов CB2-рецепторов повышает их тягу к алкоголю. В 2006 году этот же автор опубликовал данные, согласно которым для японских мужчин, обладающих определенным вариантом гена CB2-рецептора, характерна высокая вероятность развития алкоголизма и депрессии. Результаты обеих работ указывают на вероятное присутствие CB2-рецепторов на клетках мозга. Однако самые спорные данные опубликованы Онаиви в 2006 году в Brain and Research и в 2008 – в New York Academy of Sciences. С помощью меченых антител группа Онаиви выявила повсеместное присутствие CB2-рецепторов на нейронах. В целом полученные Онаиви результаты свидетельствуют о том, что избирательные агонисты CB2-рецепторов могут действовать на психику так же, как собственно каннабиноиды, что делает невозможным их клиническое применение.
Немного обнадеживает то, что ни одной из лабораторий не удалось воспроизвести результаты Онаиви. Многие исследователи безрезультатно использовали специфические антитела для выявления в нейронах информационных РНК или активных генов, обеспечивающих экспрессию CB2-рецепторов.
Онаиви заявляет, что его предшественники не смогли выявить экспрессию CB2-рецепторов на нейронах из-за несовершенства используемых ими методов вестерн-блоттинга и изучения экспрессии генов. Другие исследователи не согласны с этим и считают, что сам Онаиви не мог использовать никаких принципиально отличающихся подходов и что, напротив, его работу нельзя считать выполненной адекватно из-за отсутствия продуманного комплекса контролей.
Например, Онаиви идентифицировал различные варианты CB2-рецепторов на клетках мозга мышей дикого типа, однако использовал только одну контрольную группу «нокаутированных» животных, не имеющих CB2-рецепторов. Кроме того, для выявления CB2-рецепторов он использовал пероксидазу, достаточно часто дающую ложно-положительные результаты. Чем дольше срезы ткани мозга инкубируются в пероксидазе, тем больше вероятность появления окраски, свидетельствующей о присутствии на клетках рецепторов. Такие ложно-положительные результаты могут появляться даже при окрашивании образцов ткани мышей, не имеющих CB2-рецепторов.
По словам Кена Макки (Ken Mackie), занимающегося изучением каннабиноидных рецепторов в университете штата Индиана (г. Блумингтон), при проведении подобных экспериментов важна не только параллельная обработка и анализ экспериментальных и контрольных образцов, но и использование «слепого метода», когда исполнитель не знает, какой образец находится у него в руках. Онаиви не придерживался этих принципов, поэтому достоверность полученных его группой результатов вызывает большие сомнения. Более того, кроме выявления CB2-рецепторов на поверхности клеток необходимо продемонстрировать присутствие внутри клеток большого количества составляющих их белков и соответствующих им информационных РНК.
Однако у Онаиви есть альтернативное объяснение тому, что ему удалось обнаружить большое количество рецепторов там, где другие увидели лишь их следы. Он заявляет, что с помощью геномного анализа доказал существование двух различных изоформ CB2-рецепторов. Предварительные результаты этой работы опубликованы в июне в журнале Genes, Brain and Behavior. Одна из изоформ преимущественно экспрессирована в мозге и семенных железах, тогда как другая – в селезенке, где впервые были обнаружены CB2-рецепторы. Онаиви считает, что используемые другими исследователями антитела не реагируют с экспрессируемой в мозге изоформой CB2-рецептора.
Существование нескольких изоформ одного рецептора, кодируемых разными генетическими последовательностями, вполне вероятно, и на сегодняшний день никто не может ни подтвердить, ни опровергнуть заявление Онаиви. А судьба нового класса противовоспалительных препаратов тем временем повисла в воздухе на неопределенный срок.
Евгения Рябцева
Портал «Вечная молодость» http://vechnayamolodost.ru по материалам The Scientist: Cannabinoid controversy.
18.09.2009